【摘　要】　　目的:检测人正常和炎症牙髓组织渗出 液中IL-8的含量,揭示IL-8与牙髓炎的关系。方法:用滤纸条浸润法 采集正常和临床诊断为急性或慢性牙髓炎患牙牙髓组织渗出液。用ELISA方法检测其IL-8含 量。结果：正常牙髓组织渗出液中检测不到IL-8，而炎症牙髓组织渗出 液中均有较高水平的IL-8（0.33～1.0μg/L），且在急性牙髓炎中的水平高于慢性牙髓炎 （P<0.01）。结论：IL-8参与了牙髓炎的发生和发展，是牙髓炎症反应中的重要 细胞因子。
　　【关键词】 IL-8； 牙髓； 渗出液； 牙髓炎

　　牙髓炎多继发于龋病,是一种以G-厌氧菌感染为主的炎症性疾病。 细 菌在直接侵害组织的同时，还释放各种毒性产物，如内毒素脂多糖（LPS）等激发机体免疫 系 统，产生多种细胞因子，参与免疫反应，造成免疫损伤。这些主要参与炎症反应的细胞因子可以统称为炎症性细胞因子，包括IL-1β、IL-1α、IL-6、TNF-α、IL-8等［1］， 对这些因子的深入研究有助于揭示炎症反应的内在机制，并成为近年来炎症研究的热点。
　　IL-8是由激活的外周血单核细胞中分离到的一种趋化蛋白［2］，对中性粒细胞（PMN ）有显著的趋化活性，同时也是PMN的激活剂。IL-8可引起PMN的形变、游走［3］， 胞内钙离子浓度升高，呼吸爆发［4］，以及一级、二级颗粒的胞外分泌［5］ 。此外，IL-8还能促进PMN向内皮细胞粘附和迁移［6］，上调人PMN表面补体受体1和 3（CR1和CR3）［7］。IL-8的所有这些活性都表明IL-8是一种重要的炎症性细胞因子 。
　　既往有学者检测牙周炎患者龈沟液（GCF）中IL-8的含量，结果表明牙周病患牙GCF中的IL-8 含量明显高于牙周健康牙［8,9］，也有学者用细菌内毒素（LPS）刺激培养的人牙髓 细胞，发现有IL-8 mRNA和蛋白的表达［10，11］, 提示IL-8可能参与牙髓炎症 的发 生，但迄今为止尚缺乏临床资料的证明。IL-8在人牙髓炎时是否有表达，表达水平如何未见 报道。
　　本研究采集了临床牙髓炎患牙牙髓渗出液，用ELISA 方法检测了其IL-8含量。

1　材料和方法

1.1　病例选择

　　以我院牙体病科门诊和急诊就诊病员中，符合临床诊断标准的急、慢性牙髓炎患牙为研究对 象 ，共56名患者56个牙，其中急性牙髓炎患牙26个，慢性牙髓炎患牙22个，年龄在19～51岁之 间。对照组8人8个牙齿来自临床因阻生需拔除的健康第三磨牙正常牙髓渗出液。要求受试者 无明显全身疾患，无患牙松动，无明显牙髓炎、牙周炎症状，近期未用过抗菌药物及免疫抑 制剂等。

1.2　渗出液的定量

　　将甲基纤维素滤纸截成底2mm，边2mm的等腰三角形滤纸条，消毒干燥备用。用微量注射器吸 取与粘性渗出液相似的正常人血清2μl至纸捻尖端缓慢注射浸润，记录纸捻尖端至浸润到达 最远部位的长度，其余纸捻均以此长度作为标准浸润长度，以使得各次取样统一为2μl。

1.3　牙髓渗出液的取样

　　正常牙及急、慢性牙髓炎患牙干燥隔湿后，麻醉下于近髓处用6#电机球钻快速穿髓，随 即将准备好的纸捻尖端放在穿髓处，待渗出液到达所需量后取出，按标准浸润长度将尖端浸 润部分剪入含100μl 0.01mol/L PBS（pH7.4）的冻存管中，立即置于－20℃中待检。

1.4　渗出液中IL-8的检测

　　采用ELISA夹心法进行检测，IL-8酶联免疫检测试剂盒由第四军医大学免疫教研室提供。操 作按 说明书进行，在酶联免疫检测仪（DG-1型，国营华东电子管厂）上测定A值，绘制标准 曲线，并将A值换算成IL-8含量（μg/ml）。

2　结果

　　来自对照组的8例正常牙髓渗出液中未检出IL-8，炎症牙髓渗出液中均检出IL-8，含量在0 .33～0.10μg/L之间，其中急性牙髓炎组高于慢性牙髓炎症组(P<0.01)。

表1　牙髓组织渗出液中IL-8含量　　　（μg/L）

	正常对照组	牙髓炎组
		急性	慢性
n	8	26	22
±s	0	0.667±0.247	0.532±0.167

t检验结果表明，急、慢性牙髓炎症组间差异显著（P<0.01）
3　讨论

　　牙髓组织在受到病原微生物侵袭时会发生炎症反应，出现炎症细胞在病损部位的聚集、 浸润 ，吞噬病原；同时这些细胞还会释放各种水解酶，引起组织液渗出，形成水肿，导致局部压 力升高加重炎症表现。在此过程中病原（主要是细菌产物如内毒素等）激活机体的细胞因子 网络系统，产生IL-1β、IL-1α、IL-6、TNF-α、IL-8等炎症性细胞因子，调节炎症的发生 和发展，其中IL-8作为趋化因子因其独特的PMN募集作用而受到格外的重视，但迄今为止IL- 8与临床牙髓病之间的关系如何却未见研究报道。
　　IL-8属诱导型细胞因子，在体内主要由单核细胞产生，但在T细胞、内皮细胞和成纤维细胞 中亦有表达［12］。成熟形式的IL-8对T细胞、PMN具有强烈的趋化作用，它可以使细 胞表达表面粘附分子、释放储存酶，引起呼吸爆发，生成活性氧化代谢产物，从而发挥溶酶 体酶活性和吞噬效应［13］。同时，IL-8还可以改变其他白细胞如嗜碱性粒细胞 ［14］、淋巴细胞［15］、嗜酸性粒细胞［16］、单核细胞［17］以 及上皮细胞［18］的活性。
　　牙髓炎是一种以炎细胞浸润、组织液渗出和组织破坏为特征的感染性疾病。对渗出液的研究 有助于探讨牙髓组织在炎症反应中的病理变化。经既往体外实验发现，培养的人外周血单核 细胞经细菌内毒素作用后，上清中可检测到高水平的IL -1β、IL-6、TNF-α和IL-8［19］，培养的人牙髓细胞经过中间型普里沃氏菌内毒素 （PLPS）的诱导也能产生IL-8［10］，因而推测牙髓组织渗出液中IL-8的有无及其含 量变化能够一定程度上反映牙髓炎症的病理情况。本实验中，我们采用滤纸法从临床采集到 8例牙髓正 常牙，26例急性牙髓炎患牙，22例慢性牙髓炎患牙，共56例牙髓组织渗出液；全部渗出液用 ELISA方法检测其中IL-8含量，结果发现，人正常牙髓组织渗出液中未能检测 出IL-8，而所有炎症牙髓组织渗出液中均可检出高水平的IL-8（含量为0.32～1.10μg/L） ，表明在没有病原刺激的情况下，牙髓组织可能并不表达IL-8或表达量很低，难以检测到， 但在受到病原侵袭后组织中的单核细胞、血管内皮细胞、牙髓成纤维细胞以及中性粒细胞（ 另 文发表）被激活，合成和分泌IL-8，参与炎症反应，这一点在对内毒素性牙髓炎的免疫组化 研究中也得到了证实［20］。
　　中性粒细胞浸润是炎症反应急性期的主要特征。IL-8是趋化PMN由外周血迁移至炎症部位的 主要因素，因而推测在炎症的急性期，组织中IL-8的含量高于慢性期。本实验结果也证实了 这一点，急性牙髓炎牙髓组织渗出液中IL-8含量高于慢性牙髓炎（P<0.01）。这一结果 也提示IL-8对急性期炎症反应中PMN的聚集起着重要的募集作用。
　　除细菌内毒素外，炎症反应初期产生的IL-1β、TNF-α也是IL-8的诱生剂［21］，产 生的IL-8再趋化和激活PMN，从而对炎症反应起到一种中转和级联放大效应，加重炎症反应 。IL-8在炎症组织与外周血液交界处——血管内皮细胞中的高表达（另文发表）进一步说明 了IL-8的这种“接力”效应。
　　在炎症反应中，细胞因子是以网络的形式发挥作用的，因而IL-8在牙髓炎症的发生发展中具 体如何起作用，与其他细胞因子如IL-1β、IL-6、TNF-α的关系如何尚需进一步研究，但由 于IL-8的主要功能是趋化PMN，并激活之释放水解酶，引起呼吸爆发，因而对于组织渗出， 形成局部压力具有显著意义，而这种压力在缺乏可让性的牙髓腔内可能成为组织坏死的决定 性因素。所以，我们认为，IL-8可能是感染性牙髓炎症难以逆转的主要原因之一。