阳性细胞主要位于基底层及棘细胞深层
图1  上皮单纯增生组(白斑)中hTERT mRNA表达    (原位杂交  x100)

    随着上皮细胞恶性程度增加阳性率呈递增趋势，与正常黏膜和单纯增生组的阳性率相比，异常增生组、SCC组的hTERT mRNA阳性检出率差异均有显著性(p<0．01)。

    肿瘤细胞呈片状弥漫性阳性染色
图2  口腔黏膜鳞癌组织中hTERT mRNA表达    (原位杂交  x100)

表1　hTERT　mRNA在正常口腔黏膜、单纯增生.
    异常增生及鳞疝中的表达    (n)

3　讨论
    癌细胞永生化是肿瘤细胞区别于正常细胞的重要特征之一，肿瘤细胞永生化的“端粒—端粒酶”假说已被实验证实。端粒酶为RNA和蛋白亚基组成的核糖核酸蛋白，它通过催化端粒合成并保持染色体的稳定性，使细胞具有持续分裂能力。有研究表明，80％～90％的恶性肿瘤均能检测到端粒酶的活性「1，3」。人端粒酶分别由hTERT基因编码的RNA组分和两种相关蛋白组成「3」，包括人端粒酶相关蛋白hTPl和hTERT，其中hTERT是端粒酶催化蛋白亚基，是端粒酶活性的限速组分，其水平决定细胞端粒酶活性，在肿瘤细胞端粒酶的激活中起关键作用「4」。细胞的永生化及肿瘤演化过程中端粒酶的激活需要诱导hTERT　mRNA的表达来实现，研究表明hTERTmRNA的表达水平与端粒酶活性的表达完全一致「5,6」。本研究结果hTERT　mRNA的阳性表达率随上皮异常增生至SCC的演变而升高。且SCC、上皮异常增生与正常黏膜及上皮单纯增生之间差异有显
著性(p<0．01)，随着正常口腔黏膜、上皮单纯及异常增生到SCC的细胞异形性逐渐增加，hTERTmRNA阳性表达率也相应地增高。这提示：在口腔癌前病变发展为SCC的过程中，hTERT mRNA的表达水平可能与癌前病变至SCC的演变一致，它的激活可能是癌变发生的重要生物学步骤。我们推测：端粒酶激活与口腔粘膜癌前病变发生癌变的分子机制有关，尤其在癌变早期发挥关键作用。随hTERTmRNA阳性表达率增高，肿瘤恶性程度增加，所以hTERT mRNA的表达可作为判断癌变潜在的依据。检测组织的hTKRT mRNA将可以从细胞分子水平而非组织水平得到癌变信号，无疑为临床依赖解剖和形态学的传统诊断方法带来新的思路，为今后诊断口腔癌前病变组织的癌变潜在趋势提供客观、有价值的观测指标。
  本文运用原位杂交技术直接对石蜡组织进行hTKRT mRNA表达检测，避免了TRAP—PCR法对标本需为新鲜组织及操作复杂等缺陷，可大量进行回
顾性研究，结果能直接反映阳性细胞的强度及范围。本结果显示：在正常口腔黏膜及上皮单纯增生组中hTERT mRNA表达水平较弱，阳性细胞主要位于基底层及棘细胞深层，上皮异常增生组中hTERT mRNA表达为由低度到中度，阳性细胞逐步由基底层向多层上皮细胞扩展。而在SCC组中大多数肿瘤细胞呈片状弥漫性，hTERT mRNA表达为中度至高度表达，这提示：hTERT mRNA的表达在一定程度上反映了细胞的增殖再生能力，癌前病变中hTERT mRNA阳性细胞可能已具有进一步演变为肿瘤的潜能。
    总之，端粒酶的活化与口腔黏膜癌前病变发生癌变密切相关，可能是发生癌变的重要生物学步骤。端粒酶的活性对于估计口腔黏膜癌变潜能以及SCC的早期诊断和预后有重要意义。采用原位杂交检测石蜡组织端粒酶基因表达，可用于肿瘤回顾性研究与检测。少数肿瘤组织未检测到hTERT mRNA阳性表达，提示可能存在端粒酶激活之外的癌变机制，有待进一步研究。