【摘要】  目的   寻找一种防止口腔癌前损害癌变的药物。方法   用1023合剂(由黄芪、绞股蓝、川芎和含硒绿茶组成)对仓鼠颊囊的实验性口腔癌前损害和癌进行了抑瘤、阻癌研究，在对动物涂擦二甲基苯蒽(DMBA)的同时，用1023中药合剂灌胃。
结果  1023合剂用药组的仓鼠肿瘤的发生比对照组推迟了12天；其异常增生和癌的发生率明显低于对照组(P＜0.01)。结论  1023合剂确有抑瘤、阻癌功效。通过正交实验分析发现，其抑瘤、阻癌的最佳配方为A2B2C2D1。
【关键词】  中药配伍    肿瘤，实验性     动物，实验

    现有研究表明，口腔癌前损害既可向前发展为癌，又可逆转为良性损害乃至愈合，还可长期处于稳定不变的状态。鉴于此，许多研究者试图寻找一种能有效阻止癌前损害癌变的药物。我们用自行研制的1023合剂(是由黄氏、绞股蓝、川芎和含硒绿茶4种中草药组成的中药煎剂)在制备仓鼠颊囊癌前损害和癌模型的同时给予灌胃治疗，以观察其抑瘤、防癌和阻癌的作用。

材料和方法

    一、药物的筛选与组成

    我们查阅了大量中医药文献，从目前现有的研究中认为具有健身、增强免疫功能和防癌的许多中草药［1］中，按中药配伍原则，兼顾多方面的协同作用，筛选4种中药组成1023(分别代表黄芪、绞股蓝、川芎和含硒绿茶，因正式动物实验的日期是10月23日，故取名1023)合剂。

    二、药物的制备

    按传统的中草药炮制方法，将4种药物分别煎制，每味药分别以1∶7、1∶5和1∶3加水煎3次(煎制时间参照中药药典)，最后浓缩成1∶1和1∶2两种浓度，按正交设计(表1)将4种药物按2个浓度水平组成8组，每组5只动物。

    三、实验性癌前损害和癌的动物模型制备

    1.动物来源：购于武汉市生物制品所，为叙利亚金黄地鼠(亦称仓鼠)。

    2.动物分组：雄性仓鼠115 只，均为7～8周龄，体重75～95 g，平均体重 83.9 g，分为5组。1组：40只仓鼠，双侧颊囊涂擦0.5% DMBA丙酮液，吹干后，每只动物用灌胃针头灌入1023煎液1 ml，其用量参照中药药典人的用量折数而来 。每周实验3次，连续12周。2组：55只仓鼠，双侧颊囊涂擦0.5%的DMBA，8周后留12只动物继续涂药至12周，其余动物留作他用。3组：5只仓鼠，双侧颊囊涂丙酮液，灌蒸馏水1 ml。4组：5只仓鼠，双侧颊囊涂丙酮液。 5组：10只仓鼠，作为空白对照。

    四、观察内容

    1.肉眼观察：每只仓鼠均编号，详细记录每次实验前糜烂、溃疡、增厚、粗糙、白色斑片或斑块、肿瘤及新生物等情况。

    2.病理切片观察：1、2组动物在实验4、6周时取1/6的实验组织、8周时取1/2的实验组织、12周时取全部实验组织活检观察。

结果

    一、白色斑片出现的时间及发生率

    1、2组在白色斑片出现的时间及发生率上无明显差异，均在实验第3周开始出现，至第6周时分别达95%和100%。

    二、肿瘤出现的时间及发生率

    1.1、2组动物的比较：2组于实验第6周初开始长出肿瘤，而1组于实验第7周末才出现肿瘤，1组比2组肿瘤出现时间晚12d。第8周时， 1组动物仅3个实验部位出现肿瘤，占4.3%；而2组有17.1%的实验部位长出肿瘤，两组间差异有高度显著性(P＜0.01)。12周时，1组的肿瘤发生率为46.7%，而2组则达100%，二者差异仍有高度显著性(P＜0.01)。

表1 1023合剂抑瘤的正交设计直观法分析

组别	A 1	B 2	A×B 3	C 4	A×C 5	B×C 6	D 7	非瘤发生率(%) (y)
1	1	1	1	1	1	1	1	62.5
2	1	1	1	2	2	2	2	16.7
3	1	2	2	1	1	2	2	70.0
4	1	2	2	2	2	1	1	50.0
5	2	1	2	1	2	1	2	33.4
6	2	1	2	2	1	2	1	70.0
7	2	2	1	1	2	2	1	33.0
8	2	2	1	2	1	1	2	62.5
								(Sy)398.1
K2	198.9	215.5	223.4	199.2	133.1	189.7	182.6
K1	199.2	182.6	174.7	198.9	265	208.4	215.5
R	-0.3	32.9	48.7	0.3	131.9	-18.7	-32.9
D	-0.075	8.2	12.2	0.075	-33	4.7	-8.2

注：A(1)：黄芪，B(0)：绞股蓝，C(2)：川芎，D(3)：绿茶，K₂为水平2
之和，K₁为水平1之和，R=K₂-K₁，D=(R)/(4)，D值以绝对值观察，下表同

表2 1023合剂阻癌的正交设计直观法分析

组别	A 1	B 2	A×B 3	C 4	A×C 5	B×C 6	D 7	非癌发生率(%) (y)
1	1	1	1	1	1	1	1	62.5
2	1	1	1	2	2	2	2	16.7
3	1	2	2	1	1	2	2	80.0
4	1	2	2	2	2	1	1	66.7
5	2	1	2	1	2	1	2	33.3
6	2	1	2	2	1	2	1	90.0
7	2	2	1	1	2	2	1	33.3
8	2	2	1	2	1	1	2	87.5
								(Sy)470.0
K2	244.1	267.5	270	260.9	150	220	217.5
K1	225.9	202.5	200	209.1	320	250	252.5
R	18.2	65	70	51.8	-170	-30	-35
D	4.55	16.25	17.5	12.95	-42.5	-7.5	-8.75

2.1组正交设计的统计分析：为了挑选抑制肿瘤发生的最佳配方，我们采用直观法对实验12周时各组的非瘤发生率进行了统计分析(表1)。结果表明，在A(黄芪)、B(绞股蓝)、C(川芎)、D(含硒绿茶)4个主因素中，B、D的绝对值最大且相同，说明B、D的即期作用最大。从药物的两个浓度水平的作用来分析，B2＞B1， D1＞D2。从交互效应分析，虽然A药和C药不如B大，但A×C的交互效应却很大，D值为-33(以绝对值计)。交互效应的分析表明，A1C1和A2C2的交互效应最强(y值都是66.25)。由此得出抑制肿瘤发生或阻止肿瘤发生的最佳配方应是A1B2C1D1或A2B2C2D1。

    三、活检结果分析

    1.1、2组不典型增生的比较：实验第4周1、2组均检出有不典型增生，2组(38.5%)高于1组(16.7%)，但无统计学意义。6周时2组不典型增生检出率为58.3%，而第1组仅为16.7%，二者差异有显著性(P＜0.05)。8周时2组的不典型增生为74.3%，1组为48.6%，差异仍有显著性(P＜0.05)。如果将癌和不典型增生均计为不良增生，则2组的不良增生率为88.6%，1组为54.2%，二者差异有高度显著性(P＜0.01)。实验12周的全部活检结果表明，2组的癌变率为66.7% ，而1组为35.0%，二者差异有高度显著性(P＜0.01)。

    2.1组实验12周时的正交设计分析：为了筛选阻止癌发生的最佳配方，我们对12周时的非癌发生率进行了正交分析(表2)，结果表明，A、B、C、D4个主因素中，以B的主效应作用最大(D值最大)，且B2的作用大于B1 。A、C两因素的单独效应不及B，但A×C的交互效应最大(D值的绝对值最大)，并以A2×C2的交互效应为最佳。D在分析中不作为主效应，但从两个水平比较看，D1作用较大，故阻止癌变或抑制癌发生的最佳配方应是A2B2C2D1，这与前文抑瘤分析的结果相似。

讨   论

    目前对口腔癌前疾病的治疗尚缺乏有效的药物，对癌前损害癌变的阻断研究是近年来的热点课题，其中尤以对中草药防癌、阻癌的研究居多［2］。本组结果表明，肉眼观，用1023合剂的1组动物肿瘤发生的时间推迟了12天，实验8周和12周肿瘤的发生率显著低于2组(P＜0.01)。病理结果同样证实，8周时不典型增生率1组明显低于2组(P＜0.05)，12周时癌的发生率1组显著低于2组(P＜0.01)。
这些结果均提示，1023合剂可以抑制肿瘤的发生，降低异常增生(癌前病变)和癌的发生率，具有防癌、阻癌的作用。

    为了筛选最理想的配方，我们对4种药物各按2种浓度水平进行了正交设计实验，以期发现主效应药物和交互效应作用。通过综合分析后证实，A1B2C1D1和A2B2C2D1为最佳配伍，其抑瘤效果最佳。对阻止癌变发生的非癌发生率的正交设计分析表明，阻癌的最佳配方是A2B2C2D1，与抑瘤生成的最佳配方之一相同。此结果提示：①B起主效应作用，A×C配伍增效显著，D亦有重要作用。②抑瘤和阻癌的最佳配方相同，说明其作用机理相似。

    我们选择4种中草药组成1023合剂，符合中医配伍原则和药物配伍增效互补机理，按现代医学理论研究结果，该合剂中的黄芪［3］、绞股蓝［4］二药有增强免疫系统综合功能的作用，而且黄芪具有双向免疫调节作用。提示该药的抑瘤、防癌效果可能是通过增强和稳定机体的免疫功能而实现的。绞股蓝具有抗肿瘤和促使癌细胞逆转到正常的作用。从正交设计分析中看，在抑瘤和阻癌中绞股蓝都是主效应药物，此实验进一步说明绞股蓝对阻止癌变有重要作用。川芎能活血、理血、改善血液循环，使药物能更有效地发挥作用。与具有 补气的黄芪合用，还可起到活气活血的作用，且二者的交互效应最强，说明二者一起应用具有增强作用。绿茶有抗突变作用［5］，硒有抑瘤作用［6］，用含硒绿茶则两种作用兼备，本研究表明绿茶亦是主效应药物，能起到抑瘤作用。因此，此合剂无论是在传统的中医理论上，还是在现代医学理论上都是较为合理的配方 ，且对动物无任何毒副作用，药源丰富，是一种很有研究潜力的防癌、阻癌或健身防癌的保健新药。

作者单位： 430070 武汉，湖北医科大学口腔医学院(陈作良、官玉芹现在厦门卫校口腔医院)

参考文献

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2解京丰，章魁华，秦锦霞，等.实验性口腔粘膜癌前病变阻断后的裸鼠移植.中华口腔医学杂志，1989，24：273-275.
3杜志德，来玉梅.黄芪的免疫作用研究进展.中草药，1988，19：40-42.
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6颜学先，王鼎年.硒与肿瘤 Ⅲ、植瘤小鼠给抑瘤剂量硒后胞浆中75Se的分布与含硒量蛋白变化.重庆医科大学学报，1989，14：85-89.