通过抑制肿瘤血管生成，阻止肿瘤生长和转移，是近年来发展起来的新的治疗肿瘤的策略。TNP-470是烟曲霉素的衍生物，体内外具有强烈的抑制肿瘤新生血管内皮细胞增殖和 血管形成的作用，其不良作用小，受到研究者的关注。联合其它治疗措施，效果可能 更好。作者以裸鼠体内口腔腺样囊性癌肺转移株（ACC-M）为模型，探讨TNP-470联合顺铂 （CDDP）对ACC-M 的抗肿瘤和抗转移作用，及其对血管密度的影响。

1　材料和方法
1.1　动物及分组
　　4～5周龄BALB/c-nu-nu裸小鼠，18只。体质量18～20g，全部雄性，SPF级。昼夜12h 交替层流架内、25～28℃下饲养。裸鼠等重，分为3组。第1组为TNP-470注射组，第2组为TNP-470+CDDP注射组，第3组为生理盐水注射对照组。
1.2　药物及用法
　　TNP-470由日本Takeda 化学工业有限公司的Hitoshi Ikeda博士惠赠，溶于1%酒精中，使用前与5%的阿拉伯胶配制。CDDP 由齐鲁制药厂生产［批号91052，齐鲁卫药准字（85）861-62］。注射肿瘤细胞后第3周开始给药，TNP-470剂量为30mg/kg，隔日1次，共7次。注入右侧皮下，注射点与左侧肿瘤相距大于2cm，以免TNP-470直接扩散至瘤周。CDDP 5mg/kg分别于第3周和第4周共分两次注入腹腔。
1. 3　 口腔腺样囊性癌生长及肺转移模型
　　ACC-M细胞悬液含5×105个细胞分别注射于裸鼠左侧背部皮下和尾静脉。皮下肿瘤于第8d出现，2周时迅速生长，此时体积已达4mm×4mm×4mm大小。
1． 4　皮下肿瘤生长治疗实验
　　皮下肿瘤体积隔日测量1次。
　　肿瘤体积（V）=ab2π/6,（其中a为肿瘤的最 大径，b为肿瘤的最小径）。

　　实验结束后第2d处死裸鼠，分别解剖皮下包块，称重，送检。裸鼠荷瘤时间为4周，治疗时间为荷瘤后2周。
1． 5　对肺转移的抑制作用
　　尾静脉注射后，给药方式同前。裸鼠处死后，解剖肺，称重, 肺转移灶计数为光镜下经肺门最大纵切面的结节数。
1．6　染色
　　皮下标本分别行HE染色和兔抗人Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化分析。参照Weidnei等［1］报道的方法，在400倍镜下计数血管密度。
1．7　统计学处理
　　采用配对t检验和χ2检验进行分析。

2　结果
2.1　TNP-470对皮下肿瘤生长的抑制作用
　　皮下肿瘤均有生长，呈球形突起，表面有结节。处死后见包块周围有包膜，能完整分离瘤块，切面呈鱼肉状。治疗组与对照组皮下肿瘤大小和重量有明显差异（P＜0.01），第1、2组抑瘤率分别为43.16%和58.87%，两组间有显著差异（P＜0.05）。
2.2　TNP-470及联合CDDP对肺转移的抑制作用
　　第1、2组肺结节数和肺重量较第3组明显减少，第2组在肺重量及肺结节数上较第1组亦有显著差异（P＜0.05）。
2.3　TNP-470对血管生成的抑制作用
　　第1、2组的血管密度较第3组减少，有显著性差异。而第1、2组间无显著差异（P＞0.05 ）。
　　实验结果见附表。

附表　TNP-470联合CDDP对ACC-M的肿瘤抑制和抗肺转移的作用(±s)

Tab.　The inhibition of TNP-470 combined CDDP on tumor growth and lung metas tasis of adenoid cystic carcinoma ACC-M(±s)

药物	皮下移植瘤体积(cm3)	皮下移植 瘤重量(g)	肺转移灶数量	肺重量(g)	微血管计数
TNP-470	0.56±0.42	1.62±0.38	25±12.1	0.71±0.19	5.89±1.96
TNP470+CDPP	0.39±0.32	1.17±0.31	17 ±9.43	0.49±0.24	5.12±1.71
0.9%NaCl	1.87±0.45	2.85 ±0.41	40±14.30	1.75±0. 32	12.53± 4.02

3　讨论
　　肿瘤血管形成机制及血管形成抑制剂已成为近年来肿瘤研究领域的一大热点。抗肿瘤血管生成已经成为众多治疗恶性肿瘤策略中新的靶点，其应用已从实验走向临床。肿瘤通过肿瘤血管从宿主获得营养和氧气，同时也通过肿瘤血管向宿主源源不断地转移细胞，在机体的其它部位形成转移灶。据研究，实体瘤及其转移灶生长至直径1～2mm 以上时，其进一步增生需要新生血管提供营养［2］。抗肿瘤血管生成主要是通过阻断肿瘤赖以生存和转移的营养来源和转移通道间接发挥作用。这种治疗具有独特的优势：（1）特异性高。成年人正常血管形成已经稳定，只有在炎症、外伤、妊娠和肿瘤状态下血管形成才被启动。（2）作用直接。所有血管内皮细胞均暴露在血液中，药物无须扩散和渗透，小剂量即可发挥较强作用。（3）不易耐药。血管内皮细胞基因表达稳定，不易突变，可长期用药。
　　在众多的血管生成抑制剂中，对TNP-470研究较多。TNP-470作用强且不良反应小，对多种人源性和动物来源的肿瘤均有抑瘤效应。TNP-470主要作用于内皮细胞从G1期到S期的转变过程，抑制特异性细胞周期蛋白的表达、细胞周期依赖激酶的激活和Rb蛋白的磷酸化［1］。通过动物实验和临床研究，其疗效已得到肯定。为进一步提高疗效，将TNP-470制成油剂［3］或动脉栓塞治疗［4］可达到目的，也可将TNP-470与其它措施如放疗、化疗结合而发挥抗瘤协同作用。
　　Kato等［5］发现TNP-470联合丝裂霉素、阿霉素、5-Fu对B16BL6恶性黑色素瘤和Lewis肺癌均有良好的治疗效果，静脉预防性注射还能有效防止皮下和肺转移的发生，并提示有可能用于临床，以提高病人的疗效。本研究应用TNP-470联合CDDP，发现对ACC-M的皮下移植瘤和肺转移均有抑制作用。TNP-470除抑制新生血管生成外，还能直接作用于肿瘤细胞，其机理可能与作用于血管内皮细胞相同［6］。加之细胞毒制剂CDDP对肿瘤细胞杀伤效应的共同作用，从血管形成和肿瘤生长两方面抑制ACC-M的生长和转移。与常规移植肿瘤后立即给药相比，本研究在肿瘤生长的最旺盛期开始给药，取得了良好疗效，说明对人口腔腺样囊性癌抗瘤作用强，两者合用疗效增加（q＞1.15）。实验中，血管密度无明显变化，可能是镜下微血管的改变较肿瘤体积和重量变化更为缓慢和迟钝。提示在研究中微血管计数仅作为辅助的参考指标。
　　本研究中，使用实验性肺转移模型并同时使裸鼠皮下荷相同肿瘤，模拟了自发性肺转移模型作为抗肿瘤和抗血管治疗的研究对象，基本满足了研究需要，能同时兼顾皮下成瘤和肺转移的优点。当然，若有口腔癌自发性肺转移和淋巴转移模型则更好。
　　TNP-470的不良反应有恶心、乏力、体重减轻，大剂量应用时尚有神经系统症状［7］。也有学者认为可引起免疫功能改变。本实验中所使用剂量为中小剂量，所有裸鼠均未出现明显的不良反应。
　　作为一种新的有前途的抗恶性肿瘤措施，其作用机理和疗效有待于进一步研究。